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文章来源：360Dx、IVD从业者网
近日，莱斯大学的一组研究人员开发了一种结合等温扩增和侧流技术的人乳头瘤病毒即时检测方法。
该团队在本周《科学转化医学》杂志上发表的一篇论文中描述了该检测方法的开发和验证。莱斯大学生物工程系前博士后研究员、作者之一凯瑟琳·昆德罗德(Kathryn Kundrod) 表示，该测试使用重组酶聚合酶扩增来放大两种 HPV 基因型的 DNA，并结合侧流技术产生视觉上的阳性或阴性结果。在纸上。
运行测试需要用裂解酶处理拭子样本（可由医生或患者收集），然后在裂解后离心样本以限制细胞碎片的干扰。然后将 DNA 稀释并添加到含有 RPA 试剂混合物的室中，并在其中进行扩增。然后将管放入侧流盒中，15分钟后返回结果。Kundrod 说，包括离心和样品制备步骤，整个过程大约需要 45 分钟。
她指出，扩增管和侧流盒的集成还避免了潜在的环境交叉污染，这种污染可能会影响测试的准确性并导致假阳性结果。
一旦开发出测试，研究人员就在资源丰富的环境（休斯顿的一个实验室）和资源匮乏的环境（莫桑比克的医院实验室）中对其进行了验证。对于休斯顿组每次反应至少有 1,000 个 HPV 16 DNA 拷贝的样本，敏感性为 100%，阳性预测值为 86%，阴性预测值为 56%。对于每次反应至少含有 500 个 HPV 16 DNA 拷贝的样本，该测试的灵敏度为 93%。Kundrod 指出，由于该组中 HPV 18 样本很少，因此团队仅确定了测试的特异性，即 100%。Rice 测试与对照测试（罗氏 Cobas HPV 检测）之间的总体一致性百分比为 85%。
她补充说，赖斯测试在该组中遗漏的不一致样本的拷贝数都非常低，该团队“并不特别担心遗漏”，因为高拷贝数样本是最重要的捕获样本。
莫桑比克验证组的结果略有不同，一些不一致的样本除了低拷贝数之外还具有高细胞含量。昆德罗德将其部分归因于该队列中的所有样本都是自行收集的。临床医生收集的样本和自行收集的样本之间的差异表明，“需要在测试中纳入细胞对照”，以捕获由于细胞含量高而导致的任何假阴性，该团队正在积极研究这一问题。
在该队列中，测试显示 HPV 16 样本的敏感性为 80%，循环阈值 (Ct) 值小于 30，表明 DNA 拷贝数较高。在 Ct 值小于 35 的 HPV 16 样本中（其中 DNA 浓度略低），该检测的灵敏度为 83%。特异性为 89%，阳性预测值为 73%，阴性预测值为 85%。在 HPV 18 样本中，特异性为 98%，阴性预测值为 85%。
Kundrod 说，该测试的一个主要用例是在资源匮乏的环境中进行 HPV 筛查和治疗计划。尽管即使在这些环境中离心也相对常见，但研究人员正在开发无仪器的样品制备方法，以完全消除离心的需要并进一步降低成本。
除了新的样品制备方法和细胞对照之外，使该测试在临床上有用的另一个主要下一步是添加 HPV 16 和 HPV 18 之外的其他 HPV 基因型。该测试中包含的两种基因型约占宫颈癌病例的 70%， Kundrod 说，但该团队希望再添加三到五个基因型，以使检测方法更加稳健。为此，该团队一直在研究一种方法，将扩增管分成多个室，其中包含针对不同基因型的试剂。
添加更多基因型的关键复杂性之一是确保每种基因型的扩增试剂不会相互干扰，因此物理分离试剂将缓解这个问题。她说，这将是“一种非常相似的整体技术，只是在同一测试中发生了一些额外的、可比较的并行反应”。
研究人员希望在更大规模、更多样化的临床试验中验证该测试，以确保该测试适用于不同人群和多种样本类型。Kundrod 表示，他们还与一家外部公司合作优化该平台，并确保在商业化到来时可以更大规模地生产。
在她看来，该测试的主要优点是与商业测试相比，不复杂、无污染、成本更低。她说，除了试剂盒本身之外，莱斯测试只需要一个加热块和离心机，这两者的价格约为每台 500 美元。墨盒和试剂估计总共花费约 5 美元。
验证研究中使用的比较测试，罗氏在休斯顿的Cobas HPV 测试和 Cepheid 在莫桑比克的护理点 Xpert HPV 测试，分别需要 Cobas 仪器和 GeneXpert 仪器。许多其他 HPV 检测，例如 Hologic 的 Aptima HPV 检测、Abbott 的 RealTime High Risk HPV 检测和 Becton Dickinson 的Onclarity HPV 检测，都在这些公司自己的平台上运行，尽管这些检测检测到 HPV 16 和 HPV 18 之外的其他 HPV 基因型。Qiagen 还为有限的资源环境提供 CareHPV 检测，该检测使用该公司的 Hybrid Capture 2 技术来检测 14 种高风险 HPV 基因型。
研究人员的目标是将该测试用于能够在一次预约的时间范围内获得可操作结果的环境，例如可以在社区卫生诊所或医院中进行测试并根据一次预约的结果提供治疗。昆德罗德说，“猛扑过去”。
她说：“我们真正设想的是，在距离人们居住地、他们自己的社区更近的一次预约中，提供整个连续的护理，以真正增加获得服务的机会。”
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发表于 2023-6-25 16:54:11