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胶体金试剂条出现假阳性的几种可能
NC膜的物理损伤
NC膜是捕获抗体的固相载体，捕获抗体喷涂并结合于NC膜上，“胶体金-标记抗体”复合物与抗原结合后，在层析过程中遇到捕获抗体，进而发生特异性免疫反应，在T线位置堆积并形成“捕获抗体-抗原-胶体金标记抗体”三明治复合物并显示红色，即为阳性结果；反之，样本中如果没有抗原，“胶体金-标记抗体”复合物不会被T线的抗体捕获，而是继续前行被远端的吸水纸吸收，则T线不显色，呈阴性结果。
如果NC膜在划线过程中，划线管的长度过长或角度不合适，划线管对NC膜造成了物理划痕，该物理划痕则有可能拦截并没有结合抗原的“胶体金-标记抗体”复合物，从而在T线显色，导致出现假阳性结果，如图1中B所示。
图1 NC膜损伤引起的假阳性结果示意图 A：阳性示意图 B：假阳性示意图
我们建议研发人员可通过试验设计精细调节划线管的长度和角度，尽量减少划线管对NC膜的损伤，以规避假阳性的潜在风险。
胶体金-标记抗体复合物封闭不完全
由于胶体金颗粒表面带有大量负电荷，其通过静电作用与标记抗体的正电荷结合并形成“胶体金-抗体”复合物，金颗粒剩余未被抗体结合的负电荷再用BSA或酪蛋白等无关蛋白质进行封闭，这样得到的“胶体金-抗体”复合物可相继与抗原、固定于NC膜上的捕获抗体发生特异性免疫反应，形成阳性结果。但是，如果胶体金上的负电荷没有被充分封闭，带有正电荷的胶体金“裸金”有可能会与捕获抗体产生静电结合，进而产生假阳性结果。
我们建议研发人员可通过试验设计选择尝试不同种类的封闭剂和封闭浓度，以减少由“裸金”引起假阳性的可能。
胶体金质量
胶体金溶液如果质量不良，例如有部分聚集体存在，聚集物粒径变大，在层析过程中容易在堵塞NC膜的孔径，因此可能在T线聚集而产生假阳性结果。
我们建议研发人员重视胶体金制备工艺中的各环节，包括试剂、纯化水及试剂瓶等，同时建议建立可行的胶体金质检规程，通过如肉眼观测、可见光比色等规程检定胶体金的均一度以减少此类原因引起的假阳性。
抗体的纯度
抗体的纯度也会影响胶体金试剂条的特异性。如果所使用的的抗体纯度不高，其中未被除去的杂蛋白或者IgG降解片段则有可能和“胶体金-抗体”复合物结合，而产生假阳性结果。
我们建议在胶体金试剂生产制备过程中，研发人员选择高品质来源的抗体也是避免假阳性的关键环节。
样品垫、稀释液的抗干扰能力
样品垫具有承载样本并对样本进行初级过滤的功能，可使样本中的待测物进行层析并发生免疫反应；事实上。样品垫的另一个重要功能是为免疫反应提供合适的pH和离子强度环境。样品垫一般要进行预处理，预处理液含有pH缓冲液、提供离子强度的盐类、用于封闭样品垫活性位点的惰性蛋白、以及增强亲水性的表面活性剂等。
网络上流传的用橙汁、可乐作为新冠试纸条的样本，使试纸条出现强阳性，其根本原因是高浓度的橙汁和可乐超出了样品垫的缓冲能力，使得“胶体金-抗体”复合物的电荷发生了变化，未结合抗原的“胶体金-抗体”复合物与T线的捕获抗体发生了非特异结合，因此出现了假阳性结果。
配有稀释液的试剂条，其功能也是为样本提供一个缓冲环境，能够进一步增强样品垫的缓冲能力，因此我们也看到当先把橙汁加入到稀释液中再加样，新冠抗原试纸条就出现了正常的阴性结果。
我们建议研发人员可尝试从样品垫和稀释液的组分和浓度优化入手，提高试剂条的抗干扰能力，以避免假阳性的发生。
样本问题 新冠抗原自测试纸条的样本为鼻拭子或口咽拭子在稀释液中浸泡后的液体，其样本相对比较澄清，一般不会出现问题。但是，其他样本类型（全血、血清、血浆）的试纸条，如高血脂样本、HAMA样本、全血样本或特殊抗凝剂样本，都有可能产生假阳性，这就需要研发人员针对性地去排查原因并寻找解决方案。
我们建议研发人员可针对不同样本类型设计相应的抗干扰解决方案，对稀释液、样品垫等进行针对性研究，并在试剂说明书或标签明显处进行提示，以避免使用错误。
工艺配方问题
在试纸条的生产工艺中，以下一些因素也有可能导致试纸条产生假阳性： 包被稀释液的成分或pH不合适 体系中表面活性剂种类或浓度不合适
我们建议研发人员需要进行大量临床试验优化试剂条的生产工艺，以确保确定的生产工艺符合性能要求。
综上，引起试剂条假阳性的原因有多种可能，试剂厂家和研发人员需要对症下药，找到“假阳性”的症结再针对性地解决问题。 ------------------------------------------------------------------------------
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发表于 2022-7-10 22:14:16
