新冠病毒核酸检测是新冠肺炎疑似病例确诊的重要依据，也可为预后判断提供重要科学依据，如《新型冠状病毒肺炎诊疗方案（试行第九版）》中把Ct值≥35作为解除隔离管理/出院的标准之一。
作为目前临床中应用最为广泛的核酸检测方法——实时荧光PCR法具有灵敏度高、特异性好、重复性佳等优点。但因其所涉及环节较多，任何一个环节出现问题都会影响核酸检测质量。
下面结合PCR检测分析前、分析中、分析后流程，介绍下常见的影响核酸检测质量的主要因素，以期更好地做好新冠病毒核酸检测的质量控制工作。
分析前阶段
此环节涉及样本采集和转运等关键操作，对于保证样本质量起着重要作用。而质量合格的样本也是避免检测结果出现问题的前提条件。
新冠病毒核酸检测采样主要有鼻咽拭子、口咽拭子、痰液、肺泡灌洗液、粪便标本、肛拭子等。
大量研究表明，不同样本类型所含病毒载量不同，因而采集不同部位样本可能影响检测结果。从取样便捷性和受检者依从性角度考虑，优选上呼吸道样本。但鼻咽拭子采样会让某些受检者产生较强不适感，因此在大规模筛查中往往采用口咽拭子样本，但可能会因病毒载量较低导致未检出。
采样操作看似简单，但还是需要经过系统培训的专业人操作，应当具备较强的理论知识和操作能力，才能在保证生物安全的基础上采集到质量合格的样本。人群大筛中需要大量的采样人员，如其采样不规范也会导致未检出情况发生。
此外，我们的评估数据表明，部分采样管保存液的保存效果欠佳，因而采样管质量也是影响结果的重要原因之一。
《医疗机构新型冠状病毒核酸检测工作手册（试行第二版）》中要求，样本应室温放置不超过4h，并应在2-4h内送到实验室。但在大筛工作中，难以完全按照上述要求执行，这也可能会导致未检出情况发生。
因此，为避免上述情况发生，要在规范采集样本后尽快（如4h内）低温（2-8℃）送检。
分析中阶段
目前国家药品监督管理局已批准30多种新冠病毒核酸检测试剂，其中绝大多数为实时荧光PCR法。大量研究数据表明，不同试剂在检测性能上存在差异，这也可能是影响检测结果的重要原因之一。
因此，实验室应在确定所用试剂前多选几种试剂进行比对验证，从而选择性能更为优良的2-3种试剂用于临床检测，淘汰性能较差的产品，更换性能优良的试剂，以更好地保证核酸检测质量。
《医疗机构新型冠状病毒核酸检测工作手册（试行第二版）》中要求应使用检测试剂配套的核酸提取试剂。若选择非配套试剂，这也可能会影响检测系统性能。我们的评估数据显示，不同核酸提取试剂间确实存在提取效率差异。因而，实验室如选用非配套试剂，应尽量按照性能确认相关要求进行性能评估。
此外，为做好分析中质量控制，需严格按照要求设置弱阳性质控品，并应参与从提取到扩增的全过程。如其结果失控，需对失控原因进行详细分析并采取后续纠正措施，以有效避免影响质量的情况发生。
不同核酸检测/抽提试剂间存在批间差问题，这可能也会影响后续弱阳性样本的检出。因此，试剂更换批号时应做好试剂批间差验证。
分析后阶段
检查中，我们发现个别实验室出现少量弱阳性质控结果失控，这也可能影响检测结果的质量。
此外，还有部分实验室在结果判读方面存在一些问题，如在大筛工作中将部分Ct值≥35的临界值结果报告为阴性，这也是不符合相关要求的。
部分检测人员存在不认真核对结果即上报的情况，这可能也影响结果报告的质量。
因此，实验室应重点加强人员培训，使得检测人员熟练掌握相关内容，认真分析判读结果，对可疑样本及时进行复检，尽力避免分析后阶段发生质量问题.
综上，实验室应从检测全流程的各个关键环节着手，通过规范化操作提高检测质量，有效避免结果的质量问题，从而为临床提供更为可靠的检测结果，为疫情防控提供最为有利的技术支撑。
【参考文献】
[1]医疗机构新型冠状病毒核酸检测工作手册（试行第二版）. 联防联控机制医疗发〔2020〕313号.
[2]新型冠状病毒肺炎诊疗方案（试行第九版）. 国卫办医函〔2022〕71号.
[3]张瑞, 李金明. 如何减少新型冠状病毒核酸检测的假阴性. 中华医学杂志. 2020.
[4]Wang X, Yao H, Xu X, et al. Limits of Detection of Six Approved RT-PCR Kits for the Novel SARS-coronavirus-2 (SARS-CoV-2). Clin Chem. 2020.
[5]Wang X, Huang Z, Song J, et al. Analytical sensitivity comparison of 14 conventional and three rapid RT-PCR assays for SARS-CoV-2 detection. J Virol Methods, 2021.------------------------------------------------------------------------------
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发表于 2022-6-3 20:41:48
