PCR实验室新冠检测又现假阳性，该怎么处理？

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作者：王超

来源：怀宁县人民医院


前些日子，华大基因出现新冠病毒样本检测出现假阳性，后查出是有人故意晃动96孔板导致样本污染，出现了假阳性，目前肇事者已被拘捕。此事件一出，新冠病毒检测假阳性成了一个非常热门的话题。的确，人为因素导致的假阳性固然可恨，可本身实验室出现污染导致的假阳性又着实让人头痛。面对突如其来的疫情，PCR检测因其高灵敏度、快速检测、操作简单被广泛应用于临床，极微量的污染都可能导致假阳性。那么如何避免和减少污染成了PCR实验室新冠病毒检测的必修课。如果实验室发生污染，我们应该如何溯源？现在笔者分别从检验前、检验中、检验后分析污染可能出现的地方。

01

检验前

主要有样本交叉污染、试剂失效以及人源性污染。


1.1样本交叉污染
a.医护采样过程中，没有践行一人一拭一管的原则，取（采）样工具之间造成的污染。
b.在核酸提取前处理过程中，使用移液器、离心管不规范导致的污染。


1.2试剂失效
a.没有使用国家临床检验中心推荐的厂家生产的试剂，试剂生产质量存疑（试剂生产过程中产生气溶胶，试剂相互污染）。
b.试剂与仪器不配，没有按照说明书进行配套设置。
c. 试剂运输过程中冷链不符合要求；或者实验相关人员试剂保存不当，导致试剂失效。
d.聚合酶抑制剂抑制了了聚合酶链式反应的进行，导致试剂失效。


1.3人源性污染
进入实验室前，按照生物安全二级实验室要求，穿好隔离衣、防护服，带好口罩。避免带入人源性细胞导致新冠病毒检测假阳性。

02

检验中

包括实验室工作人员操作不规范导致的的污染、环境清洁消毒不彻底出现的污染等问题。


a.操作不规范
加样枪使用不规范，枪头碰壁沾有病毒液未及时发现。在吸取病毒液的时候样本出现交叉污染。吸头、8联管使用不当也易造成污染。扩增前8联管应选择合适的盖子盖严实，严禁有缝隙，盖不严易产生气溶胶污染PCR扩增仪，导致反应假阳性。


b. 清洁消毒不彻底
核酸的扩增需要PCR扩增仪严格的温控系统调控下经过变性、退火、延伸三个过程完成核酸指数式的扩增，高温作用下极易产生气溶胶，微量的气溶胶污染也会被放大数千亿倍造成假阳性的出现。

03

检验后

a.聚合酶链式反应结束后，待8联管冷却后，放入盛有84的生物安全袋里，不宜打开立刻打开，恐污染反应孔道。


b.实验室操作人员的资质以及核酸报告的判读不当、实验室的消毒不彻底、样本的高压处理不当等均可引起实验室污染。


随着RT-PCR临床应用的越来越广泛，其质量控制亦越来越引起大家的注意。对于可能出现的假阳性的处理措施如下：


1.采样场地应通风，坚持划分清洁区和污染区，督导医护规范采样，避免样本之间出现交叉污染。样本采集后保证单人单管由专人冷链运输。


2.实验室重地，闲人免进。很多时候是一句空话，严格控制PCR实验室人员进出，避免污染的产生。


3.实验室工作人员规范实验操作，实验室检测技术人员应具备基因检验相关培训合格证书（新冠培训合格资格证）等检测资质后上岗。操作过程中要注意更换手套和注意使用手消。及时检查8联管的完整性及枪头的使用情况，避免污染。


4.严格采购临检中心推荐厂家的试剂，且入库前做好性能验证，并且需要做好日常使用记录，实验室应采购两种不同厂家的试剂，不同厂家不同批号试剂禁止混用。


5.试剂在使用前应室温解冻，避免高温解冻。开盖轻柔，离心机均匀离心数秒，避免气溶胶产生。


6.严格设置三份阴性对照和一份阳性对照随机放入样本中检测，设置空白对照检测环境污染情况。若有可疑样本时需用另一种试剂复检。


7.严格执行实验室每日消毒工作，使用 0.2% 的84消毒液或 75% 酒精对实验台面、地面进行消毒清理，且消毒剂需新鲜配置（<24h）。生物安全柜内台面加样枪需要用75% 酒精擦拭。如有必要还可可以使用一种无毒无害的专门去除表面核酸污染物的喷雾剂，对核酸降解有显著效果，适用于PCR实验室日常清洁及核酸污染后应急处置。


实验室的污染源有很多，处理措施大同小异，欢迎大家交流。

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