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分子诊断第1站:8种性传播疾病检测

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发表于 2021-2-26 22:36:26 | 显示全部楼层 |阅读模式
性传播疾病(STD, sexually transmitted disease),顾名思义以性接触为主要传播方式的一组疾病。国际上将20多种通过性行为或类似性行为引起的感染性疾病列入性病范畴。较常见的性病有淋病、梅毒、非淋菌性尿道炎、尖锐湿疣、沙眼依原体、软下疳、生殖器疱疹、滴虫病、乙型肝炎和艾滋病等。

其中,梅毒、淋病、生殖器疱疹、尖锐湿疣、软下疳、非淋菌性尿道炎、性病性淋巴肉芽肿和艾滋病等8种性病被列为我国重点防治的性病。其中梅毒、淋病、艾滋病属于《中华人民共和国传染病防治法》规定管理的乙类传染病。

流行病学
据WHO统计报道:
  • 全世界每天有100多万人获得性传播感染。
  • 每年估计有3.57亿人新感染下述四种性传播感染中的一种:衣原体、淋病、梅毒和滴虫。
  • 估计有5亿多人感染生殖器单纯疱疹病毒。
  •   超过2.9亿名妇女感染人乳头瘤病毒,它是宫颈癌的主要致病因素,每年造成57万例宫颈癌和超过30万例宫颈癌死亡。
  • 2型单纯疱疹病毒和梅毒等性传播感染会使艾滋病毒感染风险增加3倍。
  • 2016年,约有100万名孕妇感染梅毒,导致逾20万例死胎和新生儿死亡。
  • 全球估计有2.4亿人患有慢性乙型肝炎;
  • 淋病和衣原体等性传播感染是女性盆腔炎和不孕症的主要病因。
  • 淋球菌抗微生物药物耐药监测规划显示,耐药性逐渐增加,且对广谱头孢菌素已出现耐药性。
传播途径通常,性病的传播途径主要有3种
  • 直接性接触传染
  • 间接接触传染
  • 母婴传播。

据统计,占90%以上的性病是通过性交而直接传染的,因此,性病的传播主要是通过性接触。

重点防治的性病及病原体诊断简介

1、艾滋病
艾滋病,又称为获得性免疫缺陷综合征(AIDS),是由于机体感染人类免疫缺陷病毒(HIV),亦被称为艾滋病毒。


  • HIV实验室检测,包括筛查实验和确认实验
当感染了HIV后,特异性的标志物会按照以下顺序出现在血液中:
  • HIV RNA
  • P24 抗原
  • HIV 抗体

所以,为了尽可能地缩短检测窗口期,目前市场上针对HIV检测试剂方法包括免疫法、分子检测法和病毒培养法,每种方法都有自己的特点和应用场所。

1.gif
HIV, 图片来源网络

2、淋病
淋病是淋病奈瑟菌(简称淋球菌)引起的以泌尿生殖系统化脓性感染为主要表现的性传播疾病。

  • 根据淋病诊断行标,实验室检查包括:

  • 涂片革兰染色镜检
临床疑似患者取分泌物,涂片,做革兰染色镜检,可见典型的多形核白细胞内革兰阴性双球菌。有明显尿道症状的男性淋菌性尿道炎尿道分泌物标本镜检阳性有确诊价值。


  • 淋球菌培养
取尿道或宫颈分泌物,或其他临床标本做淋球菌培养,可从临床标本中分离到形态典型、氧化酶试验阳性的菌落。取菌落做涂片检查,可见革兰阴性双球菌,糖发酵试验分解葡萄糖,不分解其他糖。


  • 淋球菌核酸检测
取尿液、尿道或宫颈分泌物标本做淋球菌核酸检测阳性。

3、梅毒
梅毒是由苍白密螺旋体苍白亚种(treponemapallidumsubp. pallidum),又名梅毒螺旋体感染人体所引,起的一种系统性、慢性性传播疾病。
  • 根据梅毒诊断行标,检测方法如下:
  • 梅毒螺旋体暗视野显微镜检查
梅毒螺旋体检查一般采用湿系聚光器。倘若斜射光线遇到载玻片上的物体,如螺旋体等,物体会发光。
  • 梅毒螺旋体镀银染色检查
梅毒螺旋体具有亲银性,可被银溶液染成棕黑色, 在普通显微镜下可观察到梅毒螺旋体。
  • 梅毒螺旋体核酸扩增试验
采用聚合酶链反应(PCR)法。通过特异引物和特定条件下的热循环反应,对皮损部位组织液、淋巴穿刺液及脑脊液等样品中的梅毒螺旋体进行核酸检测, 在早期梅毒、神经梅毒和先天梅毒等诊断中具有一定的价值。 PCR引物:梅毒螺旋体核酸扩增检测一般使用bmp、 tpp47、 polA等基因序列的引物。
  • 梅毒血清学检查
当人体感染梅毒螺旋体后4周~10周,血清中可产生一定数量的抗类脂质抗原的非特异性抗体(反应素) 和抗梅毒螺旋体抗原的特异性抗体。这些抗体均可用免疫学方法进行检测。血清学检查是辅助诊断梅毒的重要手段。

根据检测所用抗原不同,梅毒血清学试验分为两大类:一类为非梅毒螺旋体血清学试验(又称梅毒非特异性抗体试验), 主要包括VDRL、 RPR、 TRUST等;另一类为梅毒螺旋体血清学试验(又称梅毒特异性抗体试验) ,包括TPPA、 FTA-ABS、 ELISA、CLIA、 RT等。 1)非梅毒螺旋体血清学试验梅毒螺旋体一旦感染人体,人体迅速对被损害的宿主细胞以及梅毒螺旋体细胞表面所释放的类脂物质作出免疫应答,在3周~4周产生抗类脂抗原的抗体(亦称为反应素)。这些抗体主要是IgG和IgM型混合抗体。非梅毒螺旋体试验是使用心磷脂、卵磷脂及胆固醇作为抗原的絮状凝集试验。 2)梅毒螺旋体血清学试验采用梅毒螺旋体提取物或其重组蛋白作为抗原,为特异性抗原,检测血清中抗梅毒螺旋体IgG或IgM抗体,其敏感性和特异性均较高。

4、尖锐湿疣
尖锐湿疣这个疾病表现为生殖道菜花状的赘生物,它的病原体是人乳头瘤病毒(HPV)。HPV是一种嗜上皮组织的无包膜双链环状DNA病毒,属于乳多空病毒科的乳头瘤空泡病毒A属,能引起人体皮肤黏膜的鳞状上皮增殖。
低危型HPV就是导致尖锐湿疣的元凶,而高危型HPV感染则和宫颈癌等一些生殖道恶性肿瘤的发生密切相关。
  • 目前临床应用广泛的HPV检测方法

主要为病毒基因组的DNA检测,该类检测方法很多,主要分为HPV分型检测及不分型检测。目前,也有HPV不分型基础上的部分分型检测,主要检测12个高危型及2个疑似高危型66和68,其中16、18型为分型检测,而其他为不分型检测。 国内HPV分子诊断试剂注册症33张,主要包括 HPV-DNA 的检测和以 HPV E 6 /E 7 mRNA 为靶分子的 HPV-RNA 检测。

5、生殖器疱疹
临床上主要是由单纯疱疹病毒-II(HSV-II),少数由单纯疱疹病毒-I (HSV-I )所引起的一种性传播疾病。
  • 目前临床上检测方法

主要以血清学检测IgM或/和IgG来判断感染情况分子诊断检测:采用核酸检测荧光PCR的方法进行病灶部位病原检测。

6、非淋菌尿道炎( non-gonococcal urethritis ,NGU)
主要是沙眼衣原体、解脲支原体等通过性接触所引起的尿道炎症,在西方国家已成为发病人数最多的性病。

  • 沙眼衣原体是一种有DNA和RNA,能够通过滤器,严格的细胞内寄生,以二分裂方式繁殖的原核细胞型微生物。
  • 实验室检测:

  • 直接涂片镜检
染色镜检,观察有无衣原体或包涵体,受取样以及操作等影响。
  • 分离培养
用感染组织的渗出液或刮取物,接种鸡胚卵黄囊或传代细胞,分离衣原体,再用免疫学方法鉴定。
  • 免疫学方法
i: 血清学试验
主要用于性病淋巴肉芽肿的辅助诊断。常用补体结合试验,若双份血清抗体效价升高4倍或以上者,有辅助诊断价值。也可用ELISA、凝集试验。 ii:病原体检测沙眼衣原体快速检测目前分定性和定量快速检测。目前流行常用的为金标定性快速检测(胶体金法)。用抗衣原体脂多糖单克隆抗体,采用双抗体夹心的形式建立的衣原体检测方法。


  • PCR试验
设计不同的特异性引物,应用多聚酶链式反应可特异性诊断沙眼衣原体,具有敏感性高,特异性强的特点,现被广泛应用。


  • 解脲支原体是介于细菌与病毒之间的最小原核生物,主要寄居于人体的泌尿生殖道,其中解脲脲原体(UU)属于解脲支原体的一种,当机体免疫力下降时,是性传播疾病的重要病原体之一,不仅可引起阴道、宫颈等生殖器感染,而且与流产、不育及胎儿宫内发育迟缓有密切关系。
  • 一般实验室检测方法:


  • 分离培养一般是通过分泌物培养来检查。
  • 免疫学血清学IgM、IgG检测
  • 分子诊断:PCR试验
设计不同的特异性引物,应用多聚酶链式反应可特异性诊断解脲支原体,具有敏感性高,特异性强的特点。

7、性病淋巴性肉芽肿
这个病是属于性传播疾病,它的病原体是沙眼衣原体,又叫第四性病。在我国,一般这种病例比较罕见。

8、软下疳
软下疳是由杜克雷嗜血杆菌感染引起,主要发生于生殖器部位多个痛性溃疡,多伴有腹股沟淋巴结化脓性病变的一种性传播疾病。本病由性交传染,临床上男性多于女性患者,在我国比较少见。

  • 一般实验室检测方法:
  • 显微镜检查
直接涂片检查发现革兰染色阴性杜克雷嗜血杆菌。此法敏感性差。
  • 培养法
杜克雷嗜血杆菌培养阳性,为诊断金标准。
  • 病理学检查
有符合软下疳溃疡的组织病理表现。组织切片中有时可找到杜克雷嗜血杆菌。
  • 核酸检测
聚合酶链反应法等检测杜克雷嗜血杆菌核酸阳性。

防控性传播疾病的意义
性传播疾病严重危害患者身心健康,可导致不育症、生殖器畸形或缺损、毁容及特征性后遗症,已成为世界性的严重公共卫生问题。
性传播疾病病原体的检测对于性传播疾病监测、诊断或血液筛查,控制性传播疾病的流行,确保优生优育等尤为重要。
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