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来源：检验医学杂志、全国体外诊断网 CAIVD
免疫学检测是一种通过抗原与抗体的相互作用来对样本中的分析物进行定性或定量分析的技术。尽管这种检测方法在医学领域中扮演着重要角色，但它的结果可能会受到多种因素的干扰，这些干扰因素贯穿于检测的全过程，包括分析前、分析中和分析后。北京医学会检验医学分会和上海市医学会检验医学分会的专家们基于国内外的研究结果，结合他们的专业意见，就免疫学检测中的干扰因素及其应对策略达成了共识，旨在为免疫学检测的精确性提供科学依据。
共识一： 应及时准确识别可能存在的干扰因素。
当免疫学检测结果与临床预期不符、不同品牌或批号的试剂盒给出不一致的结果、出现极端值、动态监测结果存在矛盾、相关项目间的检测结果相互矛盾或稀释后回收率低时，实验室应考虑可能存在干扰因素。以下是一些常用的识别和处理方法：
1. 识别干扰因素的常用方法：
• 使用具有不同结合位点的其他方法或来自不同物种的抗体进行复测，通过比较两种方法的结果来判断是否存在干扰。
• 采用不同的检测系统进行重测，但需注意不同检测平台之间可能存在的差异。
• 使用动物血清或专用稀释液对样本进行梯度稀释，如果待测物浓度的变化不成比例，则表明可能存在干扰物。需要注意的是，干扰物并不总是以预期的方式影响稀释后的结果，一些非特异性结合物质，如非特异性抗体、干扰蛋白、非特异性试剂成分，可能会在实验中与待测物非特异性结合，其影响可能随着稀释倍数的增加而减少。
2. 识别自身抗体或嗜异性抗体：
• 直接检测样本中是否存在自身抗体或嗜异性抗体。
• 使用阻断法，即用多个物种来源或不同浓度的阻断剂处理样本后再进行检测，通过比较阻断前后的结果来判断是否存在嗜异性抗体或人抗动物抗体的干扰。同时，需要注意阻断剂本身可能对待测物产生的影响。
3. 识别大分子干扰物：
• 混合法：在鉴别巨分子TSH等大分子干扰物时，可以将患者的样本与已知甲减患者的样本混合，如果甲减患者的TSH回收率在85%～97%之间，则提示存在巨分子TSH。
• 沉淀回收试验：使用聚乙二醇（PEG）6000沉淀样本后进行回收试验，如果回收率低于40%，则表明可能存在大分子蛋白干扰。对于高敏心肌肌钙蛋白I（hs-cTnI），回收率低于20%可能提示存在大分子复合物干扰。
• Protein A/G处理：使用Protein A/G处理样本后进行回收试验，如果患者样本的回收率低于对照样本，则表明可能存在大分子复合物干扰。
• 凝胶过滤层析法：作为鉴别大分子干扰物的金标准方法，如鉴别巨分子TSH和巨泌乳素。需要注意的是，阴性结果不能排除干扰，而阳性结果则可能表明存在干扰。在怀疑存在干扰时，可以使用两种以上的方法进行测试，以排除干扰因素或识别干扰物。
内源性干扰因素及其处理措施
内源性干扰因素主要涵盖两类干扰机制。
其一，能够改变样本里待测物的浓度，进而干扰检测结果，像自身抗体、激素结合蛋白就属于此类；
其二，通过干扰抗原与抗体之间的结合过程，对检测结果造成影响，例如类风湿因子、嗜异性抗体以及人抗动物抗体等。在免疫学方法运用过程中，这些内源性干扰因素可能会使检测结果出现正向或负向的偏差。所以，检验技术人员必须深入了解内源性干扰因素的作用机制，在标本检测的前、中阶段，尽可能降低其对检测结果的不利影响。
共识二： 可从预防和方法学改进2个方面入手，降低类风湿因子对免疫学检测的干扰
类风湿因子，它属于自身抗体的范畴，其靶抗原是变性免疫球蛋白（Ig）G 的 Fc 片段。在检测时，它能够与二抗以及捕获抗体的 Fc 段相结合。特别是运用捕获法测定 IgM 抗体的情境下，类风湿因子容易和 Ig 发生聚集现象，最终致使检测结果呈现假阳性。不过，要是类风湿因子仅仅与信号抗体或者捕获抗体结合，就会产生空间位阻，阻挡捕获抗体 - 抗原 - 信号抗体复合物正常形成，使得检测信号减弱，引发假阴性结果。在酶联免疫吸附试验（ELISA）夹心法试验环节，类风湿因子会和固相抗体结合，接着再与酶结合物发生显色反应，从而造成假阳性结果。相关研究表明，类风湿因子对 ELISA 检测诸如 D - 二聚体、乙型肝炎标志物、TSH、cTnI、甲状腺激素（TH）、性激素结合球蛋白、脂肪酶、TORCH IgM 抗体、糖类抗原（CA）19 - 9 等指标时，会产生极为明显的干扰。另外，类风湿因子对免疫比浊法的干扰主要出现在反应的第二步，它会促进抗原、抗体复合物聚集，使得检测结果出现假性增高情况。需要注意的是，针对不同的检测体系，类风湿因子引发干扰的机制与程度各异，并且这种干扰和其自身浓度并没有直接关联。
1、预防措施
类风湿因子与类风湿性关节炎、EB 病毒感染等病症联系紧密。鉴于此，在检测过程中，务必紧密结合患者的病史资料以及其他实验室检测所得结果，全方位综合考量，以此精准分析类风湿因子是否对最终检测结果造成干扰，从而保障检测结果的准确性。
2、方法学优化 1）试剂筹备环节： 选用 F（ab'）2 替换完整的 IgG，如此一来，便能有效规避类风湿因子与试剂中相关抗体片段的非特异性结合，减少干扰因素。 2）标本检测阶段： ① 借助阻断试管采集标本，或者向标本中添加封闭阻断剂，利用其特性吸附标本内的类风湿因子，最大程度降低其对检测的不良影响； ② 运用 25% PEG6000 沉淀类风湿因子，先振荡混匀 10 秒，再以 10000×g 的离心力离心 5 分钟，最后取上清液用于检测，通过这种预处理方式去除类风湿因子，提升检测精度； ③ 采用 0.9% NaCl 溶液预先稀释样本，稀释过程可有效减少类风湿因子在 IgM 抗体检测时产生的干扰，确保检测信号真实可靠； ④ 在样本稀释液里添加经热变性处理的 IgG，利用热变性 IgG 与类风湿因子的结合特性，阻止类风湿因子干扰正常检测反应； ⑤ 将动物血清、抗人 IgM 或抗人 IgG 加入标本之中，借助这些外源性物质与类风湿因子的相互作用，降低其干扰作用； ⑥ 添加 2 - 巯基乙醇（终浓度为 0.1 mol・L⁻¹），该物质能够特异性地降解 IgM 型类风湿因子，避免其对检测体系的破坏。
此外，临床实验室应强化与试剂品牌方的沟通协作，携手探寻更多行之有效的干扰应对方案，持续优化检测流程。
共识三： 人抗动物抗体和嗜异性抗体对免疫学检测的干扰类似，可通过相似的途径减少干扰
嗜异性抗体与人抗动物抗体 嗜异性抗体是人体自发产生的一类特殊抗体，它具备与其他动物 Ig 相结合的能力，其作用机制是通过结合 IgG 的 Fc 段，进而与检测系统中的标记抗体或捕获抗体发生相互作用，最终导致检测结果出现假阳性或假阴性的偏差。在实际检测中，嗜异性抗体会对人绒毛膜促性腺激素（HCG）、促卵泡激素（FSH）、甲状旁腺激素（PTH）、TSH、促肾上腺皮质激素（ACTH）等多种指标的检测过程造成显著干扰。尤其在免疫透射比浊法里，嗜异性抗体能够促使偶联抗体的胶乳颗粒聚集在一起，使得反应体系的浊度异常增强，进而引发假阳性结果。
人抗动物抗体与嗜异性抗体在结构和功能上存在一定的同源性，其产生大多与动物 Ig 治疗经历或频繁接触动物有关。通常情况下，人在接触动物 2 周左右便会产生抗体，且这些抗体在人体内可存留长达 30 个月之久。人抗动物抗体对不同的免疫分析方法干扰机制各异。在双位点免疫分析法场景下，人抗动物抗体能够同时连接检测抗体和捕获抗体，形成异常的免疫复合物，从而对检测结果造成正向干扰；然而，当它分别与这两个抗体单独结合时，又会破坏正常的免疫反应进程，导致负向干扰。不仅如此，高浓度的人抗动物抗体还会对竞争法检测产生干扰，影响检测结果的准确性。已有研究证实，人抗动物抗体会干扰包括甲状腺激素（TH）、心脏标志物、PTH、风疹病毒 IgM、性激素等多种物质的检测流程，为临床诊断带来诸多挑战。
1、预防策略 当使用动物来源的抗体为患者开展诊疗活动时，合理给予免疫抑制剂能够在一定程度上阻碍人抗动物抗体的生成，进而有效降低人抗动物抗体引发的检测干扰。不过，需要注意的是，免疫抑制剂对于嗜异性抗体的抑制效果却并不理想，所能发挥的作用微乎其微。
2、方法学改良 1）试剂筹备阶段： ① 尝试以羊抗体替换试剂盒中原有的鼠抗体，鉴于羊抗体与人抗动物抗体或嗜异性抗体的反应特性不同，有望减少不必要的免疫反应干扰； ② 采用不同种属的分析用抗体，例如联合运用多克隆抗体（PcAb）和单克隆抗体（McAb），通过多样化的抗体组合，降低免疫原性带来的干扰风险； ③ 运用聚乙二醇（PEG）包被抗体，利用 PEG 的物理化学特性，在抗体表面形成一层 “保护屏障”，减少其免疫原性造成的不良干扰； ④ 选用 F（ab'）2 片段取代完整的 Ig 或者借助酶处理 Ig 去除 Fc 段，其中兔 F（ab'）2 片段是较为常用的选择，以此规避 Fc 段引发的免疫反应； ⑤ 引入人源化嵌合抗体，凭借其与人体免疫系统的良好兼容性，降低免疫原性，或者采用重组单克隆 IgY 作为试剂抗体，从源头上削减干扰因素。
2）标本检测时刻： ① 由于嗜异性抗体和人抗动物抗体都属于大分子物质，借助超速离心技术（10000×g 离心 10 分钟），能够依据分子量差异将其部分分离出去，从而减少对检测的干扰； ② 运用 PEG6000 对标本进行预处理，促使嗜异性抗体或人抗动物抗体沉淀析出，随后通过离心去除沉淀，再对处理后的上清液进行检测，确保检测准确性； ③ 向标本中添加过量的动物 Ig，利用抗原 - 抗体特异性结合原理，吸附嗜异性抗体或人抗动物抗体，净化检测样本； ④ 采用 Protein A/G 等方法，借助其与抗体的亲和作用，降低干扰物质的影响；在双位点检测流程中，推荐采用两步法检测模式，并且在第 1 次洗板操作完成后加入阻断剂。阻断剂分为非特异性和特异性两类，可添加至稀释液或用于预处理标本，通过与干扰物紧密结合，达到降低干扰的目的。
① 非特异性阻断剂： 常用的非特异性阻断剂是浓度为 1% 的正常动物血清，它能够非特异性地结合部分干扰物质。在商品化的非特异性阻断剂中，MAK33、MAB33、poly MAB33 等较为常见。其中，MAK33 有其特殊的使用要求，需经过 60℃的热处理，并结合小牛 Ig 后，才能充分发挥阻断干扰的作用。
② 特异性阻断试剂： 特异性阻断试剂主要靶向人 Ig，在商品化产品里，Ig 抑制剂、异嗜性抗体封闭剂、异嗜性抗体封闭管等是典型代表。Ig 抑制剂属于混合鼠 McAb，其免疫原为人抗动物抗体和嗜异性抗体，与人抗动物抗体之间具有颇高的亲和力（达到 109 L・mol⁻¹），因而可作为人抗动物抗体的特效阻断剂。异嗜性抗体封闭剂本质是鼠抗人 IgM 的 McAb，它降低干扰的效果与人和动物抗体之间的结合常数紧密相关（通常为 106 L・mol⁻¹）。Ig 抑制剂和异嗜性抗体封闭剂二者结合力较强，在某些检测项目中，它们的阻断能力要优于非特异性阻断剂。然而，不得不承认的是，即便如此，这两类抗体也都无法做到彻底消除干扰，仍有一定的提升空间。
共识四： 应降低自身抗体对免疫学检测的干扰
自身抗体 自身抗体的靶抗原源自机体自身成分，其中大部分为 IgG 型。这类抗体主要针对自身抗原的免疫学检测过程施展干扰 “魔力”。举例来说，抗胰岛素抗体能够干扰胰岛素的精准检测，抗 cTnI 抗体会对 cTnI 的检测结果造成偏差，抗甲状腺球蛋白抗体则会搅乱甲状腺球蛋白的检测流程。当自身抗体与靶抗原相互结合后，会形成稳定的复合物，这种复合物的存在往往会对靶抗原的测定结果带来负向干扰，使得检测值低于真实水平。
此外，还有一种特殊情况，巨分子 TSH 是由抗 TSH 自身 Ig 与 TSH 结合而成的免疫复合物，它的出现会造成 TSH 检测结果呈现假性升高，误导临床判断。与之类似的无活性大分子物质还有巨泌乳素，它是抗泌乳素抗体和泌乳素紧密结合后形成的免疫复合物，会致使泌乳素检测结果出现假性升高现象，进而可能引发误诊为高泌乳素血症的情况，给患者诊疗带来不必要的困扰。
在检测流程中，可向标本内添加 25% 的聚乙二醇 6000（PEG 6000），通过离心操作去除沉淀物质后，采集上清液用于后续检测步骤。除此之外，还能够采用 pH 值为 3.0 的洗脱液来解离抗原抗体复合物；亦或运用解离液（含 0.3% 的曲拉通 X - 100、1.5% 的 3 - [(3 - 胆酰胺丙基) 二甲基铵基] - 1 - 丙磺酸（CHAPS）以及 15% 的十二烷基硫酸钠（SDS））对标本中的免疫复合物进行解离处理，随后再开展测定工作；还可以将 100 μL 的标本与 50 μL 的解离液充分混匀，置于 56 ℃的环境下处理 30 分钟，以此降低自身抗体所带来的干扰。
共识五： 应降低补体对免疫学检测的干扰
关于补体方面，急性炎症、组织损伤以及风湿免疫病等多种情况均会致使血清补体水平上升，而且酶联免疫吸附测定（ELISA）检测系统中的酶结合物也有可能引发补体活化现象。此外，抗体结构发生的改变会推动补体 1q 与免疫球蛋白 Fc 片段相结合，进而产生假阳性的检测结果。与此同时，活化后的补体能够与固相抗体相结合，抑制抗体和抗原之间的特异性反应，最终导致出现假阴性的检测结果。
在对检测标本进行处理时，有多种方式可以灭活补体，从而降低其对检测结果的影响。一种方法是将血清置于 56℃的环境下加热 30 分钟，以此实现补体系统的灭活；另一种可行的途径是使用乙二胺四乙酸对标本进行稀释，当乙二胺四乙酸的终浓度达到 10 至 40 mmol・L-1 时，便能有效地灭活补体。此外，像紫外线照射以及机械振荡等其他手段，同样能够达成补体灭活的目的，进而为检测结果的准确性提供保障。
共识六： 应采取相应措施准确测定激素
关于激素结合蛋白：激素结合蛋白在机体内扮演着运输激素的关键角色，作为载体蛋白，它能够与激素紧密结合，而这种结合作用会直接引发标本中待测物浓度的改变，进而干扰检测结果。例如，性激素结合球蛋白具有与睾酮相结合的能力，二者结合后会使游离睾酮的浓度降低，在检测睾酮含量时，这种结合现象就会对检测结果产生负向干扰。在甲状腺激素方面，超过 99% 的三碘甲状原氨酸（T3）以及甲状腺素（T4）会与甲状腺结合球蛋白（TBG）相结合，使得它们处于游离状态的成分极低，因此，TBG 浓度的任何波动都可能对甲状腺激素（TH）的检测结果产生显著影响。对于类固醇激素而言，其会与性激素结合球蛋白、皮质醇结合球蛋白发生结合作用。而生长激素结合蛋白能够与人体中大部分的生长激素相结合，这样一来，就会阻碍生长激素与检测抗体的正常结合，最终导致生长激素的检测结果出现偏低的情况。
在检测标本的过程中，为了更准确地获取检测结果，可采取多种方法来避免激素与蛋白结合对检测结果的影响。一方面，可以通过使蛋白变性或者加入阻断剂的方式，来抑制激素与蛋白之间的结合，从而使检测能够更接近真实的激素水平 。另一方面，在试剂研制阶段，建议针对结合型激素和游离型激素分别设计不同的抗体结合位点，进而对二者分别进行测定，这样能够为临床诊断提供更为丰富和准确的检测信息。除此之外，还可运用一些其他措施，例如改变 pH 值、使用化学试剂使复合物解离等，但在实施这些措施时，必须要确保其不会对待测物的结构或性质造成不可逆的改变，以保证检测结果的可靠性和有效性 。
共识七： 应采取有效措施降低脂血对免疫学检测的影响
脂血是临床检验中常见的干扰因素之一。高脂饮食、机体脂代谢紊乱以及输注脂肪乳等情况，均有可能引发高脂血症，进而导致血液中血脂浓度出现异常增高的现象 。脂血的主要成分是乳糜微粒和极低密度脂蛋白，其中的乳糜成分会致使反应体系的浊度明显增高，这不仅会对检测结果产生干扰，还会使仪器的吸样系统出现误差，进而影响检测结果的准确性。在临床实践中，大多实验室会依据三酰甘油（triglyceride，TG）的浓度来判断检测结果的可靠性。相关研究表明，轻度脂血会对时间分辨荧光分析法测定游离雌三醇的结果产生显著的正干扰，而中重度脂血则会对中高水平的游离雌三醇测定产生明显的负干扰。
其一，采血环节需确保空腹状态，以此减少饮食因素对检测结果的潜在干扰。 其二，针对常规离心后的标本，应加盖妥善密封，随后实施真空超速离心或者高速离心操作，最终对下层清液进行检测，通过这种方式可有效分离出较为纯净的检测样本，提高检测的准确性。 其三，可运用 PEG 6000 对脂血标本予以预处理，在此过程中，含载脂蛋白 B 的脂蛋白将会沉淀，除高密度脂蛋白外，绝大部分脂质会随之沉淀，进而降低脂质对检测的影响。 其四，还能够采取超滤、血清稀释、磷钨酸 - 镁法、乙醚提取以及使用脂质清除剂（例如 LipoClear）等一系列措施来处理高脂血标本，这些方法能够有效减少乳糜微粒对检测结果的不良影响，使检测结果更加可靠。
共识八： 应采取有效措施降低黄疸对免疫学检测的影响
黄疸标本在临床免疫学检验中较为常见。肝胆疾病以及自身免疫性溶血等情况可能致使胆红素水平上升，无论是未结合胆红素还是结合胆红素，其浓度的异常升高均有可能引发假阴性的检测结果。在免疫透射比浊法检测体系中，胆红素自身具有的本底吸光度会对检测产生较大程度的干扰。由于胆红素具有不稳定性，可能导致吸收曲线出现漂移现象，所以在这种情况下，即便采用双波长分析方法，有时也难以理想地消除本底干扰。相关研究显示，在运用免疫散射比浊法或者透射比浊法测定尿白蛋白时，胆红素可能会致使检测结果出现假性升高的情况，这无疑会给临床诊断带来一定的误导。
在应对检测过程中黄疸对结果的干扰时，可采取以下几种措施： 首先，选取正常体检者的血清作为稀释液，对待测标本实施倍比稀释，通过这样的方式精准确定最为合适的稀释倍数，从而有效降低黄疸因素对检测结果的不良影响，提升检测的准确性与可靠性。 其次，合理设置副波长，例如将其设定为 540nm，以此来减少黄疸标本中胆红素等物质对检测信号的干扰，优化检测的精度和稳定性。 再者，还可以考虑添加胆红素氧化酶，通过酶的作用使胆红素发生转化，进而减轻胆红素所带来的干扰，确保检测结果能够更真实地反映标本的实际情况。
共识九： 可选择特异性强的抗体，采用凝胶色谱层析法从标本中提取待测物后，再进行检测，以降低交叉反应物质对免疫学检测的干扰
在免疫检测领域中，交叉反应物质是一个不容忽视的因素，它能够引发免疫交叉反应。这是因为交叉反应物质与待测物在结构上具有相似性，或者拥有高度同源的抗原表位。例如，当待测标本中存在类地高辛物质时，就会对单克隆抗体针对抗原的检测产生正向干扰。从原理上讲，交叉反应物在检测过程中相当于增加了待测物的实际浓度，这就容易导致检测结果出现假阳性的情况；然而，另一方面，相较于待测物，交叉反应物在与抗体结合后的解离速度更快，这种特性又可能致使检测结果呈现假阴性。以人绒毛膜促性腺激素（HCG）为例，它与众多物质存在同源结构。具体而言，HCG 的 α 亚基与促甲状腺激素（TSH）、促黄体生成素（luteinizing mone，LH）以及卵泡刺激素（FSH）的 α 亚基具有高度的同源性，这也就意味着它们之间存在交叉抗原性；同时，HCG 的 β 亚基与 LH、丝氨酸蛋白酶以及转化生长因子的 β 亚基也具有较高的同源性，这些同源结构会引发交叉反应，最终导致 HCG 的免疫分析结果出现假性偏高的现象，给临床诊断带来潜在的误导风险。
共识十： 可用卵白蛋白和Cu2+将溶菌酶封闭，阻断其桥连作用，从而降低溶菌酶对免疫学检测的干扰
溶菌酶 溶菌酶主要分布在泪液、唾液、血浆、尿液、乳汁等体液中，与较低等电点的蛋白更易结合，在双抗体夹心法测定系统中，溶菌酶可通过桥连酶标IgG和包被IgG正向干扰检测结果。
共识十一： 可用0.9% NaCl溶液稀释标本后再测，以降低M蛋白对免疫学检测的干扰
M蛋白 M蛋白是由浆细胞或B淋巴细胞单克隆恶性增殖产生的一种异常Ig，主要干扰免疫比浊法的检测结果。免疫透射比浊法较免疫散射比浊法更易受M蛋白的干扰，其可能原因是免疫散射比浊法在检测前对标本进行了预稀释，从而降低了M蛋白的干扰。
共识十二： 应采取有效措施降低生物素对免疫学检测的干扰
外源性干扰因素及处理措施 在免疫检测的实践过程中，外源性干扰因素常常会对检测结果的准确性造成显著的不良影响。这些干扰因素的产生，主要源于免疫检测反应中所涉及的标记物，以及在标本采集、处理与保存等环节中存在的不当操作，诸如添加抗凝剂时的不合理方式等，进而导致检测平台的稳定性受到破坏，使得标本出现被污染的情况，甚至引发溶血和纤维蛋白析出等现象。
生物素作为一种水溶性的 B 族维生素，在免疫检测的标记反应里，当它与抗原或抗体进行结合时，从活性层面来看，一般不会对后者的原有活性产生明显的改变。然而，从空间结构的角度分析，生物素与被标记物之间极有可能存在空间位阻效应，而这种空间位阻的存在，恰恰会对免疫学检测结果的准确性形成干扰。
当受检者摄入了过量的外源性生物素时，这种情况将会对以生物素 - 链霉亲和素作为固相分离系统的免疫学检测构成严重的干扰。这里所提到的外源性生物素，具体是指人体在摄入生物素之后，于血液中存在的游离生物素以及其代谢所产生的相关产物。
值得注意的是，外源性生物素对检测结果的干扰具有复杂的特性，它既能够导致出现假阳性的干扰结果，也可能引发假阴性的干扰情形。例如，在运用夹心法对促甲状腺激素（TSH）进行检测时，一旦血清中游离生物素的含量超出正常水平，过量的游离生物素便会迅速占据链霉亲和素磁珠的结合位点。如此一来，那些原本应当与捕获抗体连接的生物素就无法顺利地与链霉亲和素磁珠相结合，这必然会使得最终的检测结果低于实际应有的水平，从而出现假阴性的情况。
而在竞争法的检测模式下，内源性分析物与标记的（信号）分析物会针对单个生物素化的抗体结合位点展开激烈的竞争。当生物素化的抗体成功结合到链霉亲和素包被的固相载体上之后，其发光信号会随着分析物浓度的逐渐增加而呈现出减少的趋势。倘若此时存在着较高浓度的生物素，那么过量的生物素就会抢先与固相载体相结合，这样就会有效地阻止内源性抗体与标记分析物之间的正常结合。与此同时，那些未能成功结合的抗体在后续的冲洗步骤中会被彻底清除掉，这就会导致发光信号出现假性的减少，最终使得检测结果呈现出假阳性的状态。
以三碘甲状原氨酸（T3）、甲状腺素（T4）、游离三碘甲状原氨酸（FT3）以及游离甲状腺素（FT4）的竞争法检测为例，生物素的存在会致使这些检测项目的结果出现偏高的现象，也就是产生了假阳性的结果。
综上所述，外源性生物素的浓度越高，并且标本的加样量越大，那么它对检测结果所造成的干扰程度也就会越发严重。但需要明确的是，这种由外源性生物素所引发的干扰情况，与待测物本身的实际水平并无直接的关联。相反，试剂中所包含的生物素浓度越高，以及反应体系中链霉亲和素磁微粒的加样量越大，那么该检测体系对抗外源性生物素干扰的能力就会越强，从而在一定程度上能够降低外源性生物素对检测结果的不良影响，保障检测结果的准确性和可靠性。
- 试剂准备阶段：
- 对于试剂生产商而言，一种可行的策略是开发并推出商品化的生物素中和试剂，以此来有效对抗外源性生物素的干扰。另外，还可以考虑适当提高试剂中的生物素含量，或者增加链霉亲和素磁微粒在试剂中的浓度，通过这种方式来增强检测体系对外源性生物素干扰的抵抗能力，从而保障检测结果的准确性。
- 在技术研发方面，应积极推动新技术的探索与应用。例如，研发能够特异性地与游离生物素相结合的抗生物素抗体，而且这种抗体不会与标记在抗体表面的生物素发生结合反应，如此一来，便可将其作为一种抗干扰成分添加到免疫检测的反应体系之中，进而显著减少外源性生物素对检测结果的干扰。
- 此外，还可以尝试通过预先制备生物素试剂 - 链霉亲和素磁微粒，并运用分子阱技术来降低生物素可能产生的干扰，为免疫检测提供更为稳定可靠的实验条件。
- 检测标本过程中：
- 从标本采集的时间节点来看，建议在患者尚未使用生物素之前进行标本采集；倘若患者已经使用了生物素，则应当在其停用生物素 2 - 3 天之后再采集标本，这样可以有效降低生物素在体内的残留量，从而减少外源性生物素对检测结果的影响。
- 在检测方法的选择上，当发现可能存在生物素干扰的情况下，建议采用非生物素 - 链霉亲和素免疫检测法对标本进行再次检测，以此来验证检测结果的准确性，避免因生物素干扰而导致的误诊。
- 还可以利用试剂盒中链霉亲和素包被的磁珠与含有生物素的血清共同孵育 1 小时，然后通过离心操作去除与磁珠结合的生物素，最后对上清液进行重新检测，这种方法能够在一定程度上降低生物素的干扰，提高检测结果的可靠性。
- 此外，在实际操作中，应当依据抗体分子所携带的可标记基团的具体种类（如氨基、醛基或巯基）以及分子的酸碱性等特性，来谨慎选择相应的活化生物素以及适宜的反应条件，确保生物素与被标记物之间能够实现更为精准有效的结合，减少因结合不当而产生的空间位阻，进而降低对免疫学检测结果的干扰。
- 同时，为了进一步减少空间位阻对免疫学检测的不良影响，可以考虑在生物素与被标记物之间引入交联臂样结构，通过这种方式来优化生物素与被标记物之间的空间关系，提高检测的准确性和稳定性。
共识十三： 应及时识别和纠正ALP对免疫学检测的干扰，以提高检测结果的可信度
碱性磷酸酶（ALP）干扰情况阐述
碱性磷酸酶（ALP）作为免疫学检测中较为常见的一种标记酶，其在检测过程中所引发的干扰问题主要与交叉反应密切相关。在免疫分析的实际操作中，由于抗体自身特异性存在一定的局限性，这就可能导致 ALP 与其他具有相似结构的物质发生交叉反应，进而产生假阳性的检测结果。
这种交叉反应的发生几率可能会受到某些药物或激素的影响，例如泼尼松、螺内酯以及氟氢可的松等药物的存在，可能会增加 ALP 与其他物质发生交叉反应的可能性。此外，像卡马西平等药物在体内代谢后所产生的代谢产物，也可能会与 ALP 发生交叉反应，从而对免疫学检测结果造成干扰。
在肾衰竭等特定的疾病状态下，患者体内可能会积累一些特定的代谢产物，而这些代谢产物同样有可能与 ALP 发生交叉反应，进而影响到检测结果的准确性。
总体而言，ALP 在免疫检测中所造成的相关干扰，其主要原因可能是由于抗体的非特异性结合，或者是标本中存在某些与 ALP 结构相似的物质，这些因素共同作用，导致了检测结果的偏差，因此在免疫检测过程中，需要充分考虑到 ALP 可能带来的干扰，并采取相应的措施加以避免或纠正。
正确评估患者状态，尽量在非疾病活动期或用药期间采集血液标本，减少疾病代谢产物或药物与ALP发生交叉反应，影响检测结果。采用合适的方法对抗原或抗体进行ALP标记；同时，提供合适的pH环境，保证ALP活性，以便其在最适条件发挥较强的催化功能。
共识十四： 应采取有效措施来降低吖啶酯对免疫学检测的干扰
吖啶酯
吖啶酯作为一类重要的化学发光标记物被广泛应用于免疫学分析，包括竞争法和夹心法免疫分析。吖啶酯以其高灵敏度和快速的光发射特性，以及高量子产率被广泛用于检测低丰度的生物标记物。吖啶酯的化学发光稳定性是一个关键问题，其一些衍生物在特定条件下不够稳定，发光强度易受pH值的影响，这可能会影响免疫学检测的准确性和重复性。在化学发光反应中，存在不导致发光的竞争性暗反应路径，这些路径在热力学上可能更适用，选择适当的测量条件对于消除相关反应对化学发光效率的影响至关重要。
共识十五： 可使用不依赖于钌标记的检测平台或采用PEG6000沉淀降低三联吡啶钌对免疫学检测的干扰
三联吡啶钌 钌是一种广泛应用于电化学领域的金属标记物，电化学发光免疫分析利用钌的化学性质，通过施加电压激发三联吡啶钌复合物，产生电化学发光反应，由此产生的光量与标本中的待测物浓度成反比。然而，使用三联吡啶钌也可能引起一些问题，尤其是当患者体内存在抗钌抗体时，可能导致假阳性或假阴性结果。如，在甲状腺功能检测中，抗钌抗体可能与三联吡啶钌标记的TH抗体或钌交联复合物发生反应，导致信号降低，引起FT4或FT3浓度假性升高，最终误诊为甲状腺功能亢进。
共识十六： 应采取有效措施降低溶血对免疫学检测的干扰
血现象的产生，除了源于体内自身的溶血机制外，还可能由多种外在因素引发。例如，在采样过程中若操作不当，使用了低渗溶液，对样本进行机械性强力振荡，或是使样本经历突然的冷冻（温度处于 -20 至 -25℃之间）以及随后的解冻过程等，均有可能导致溶血情况的出现。
当溶血发生时，血红蛋白（Hb）从红细胞中释放出来，这一过程会对免疫学检测结果造成或正或负的干扰。具体而言，溶血会致使采用电化学发光法检测肌红蛋白（Myo）和心肌肌钙蛋白 T（cTnT）时，所得结果呈现偏低的趋势。即便溶血程度较轻，其对 Myo 和 cTnT 的检测结果也会产生较为显著的影响。
Hb 中的亚铁血红素具备类似过氧化物酶的活性，这种特性会在 ELISA 检测系统中引发非特异性显色反应，进而干扰检测结果。比如，在运用一步法测定乙型肝炎表面抗原时，溶血就会产生正干扰作用，并且溶血程度越严重，这种正干扰的效果就越显著。
对于人类免疫缺陷病毒抗体的检测，溶血会导致 ELISA 检测结果出现假性偏高的情况，然而化学发光法受溶血的影响相对较小。因此，化学发光法在人类免疫缺陷病毒抗体的筛查工作中具有优势，可作为主要的检测方式。
在胰岛素和 C 肽的定量化学发光免疫法测定中，溶血会使得检测结果偏低。由于红细胞中的叶酸水平大约是血清中的 16.7 倍，所以溶血会造成化学发光法检测叶酸的结果偏高。此外，溶血所释放出的 Hb 还可能与铁蛋白抗体发生非特异性反应，最终导致化学发光免疫分析定量检测铁蛋白的结果偏高。
综上所述，溶血作为一种常见的样本异常情况，在免疫学检测中可能会对多种检测项目的结果产生显著干扰，因此在检测过程中应尽量避免溶血现象的发生，同时对于溶血样本的检测结果应进行谨慎的分析和判断，必要时采取相应的纠正措施以确保检测结果的准确性和可靠性。
应规范标本采集、运输、处理流程，必要时重新采集标本复查。另外，在报告检测结果时要注意溶血的影响，并在数据中标注 。
共识十七： 应采取有效措施降低纤维蛋白对免疫学检测的干扰
纤维蛋白
在没有促凝剂和抗凝剂存在的情况下，正常血液标本会在采集2 h后完全凝固。在临床检验工作中，对未充分凝固的血液进行离心会导致纤维蛋白原残留，形成肉眼可见的纤维蛋白块，易造成假阳性结果。纤维蛋白会造成TH假性偏高，对固相双位点化学发光法测定HCG产生负干扰。
·促凝剂及采血管的选择：
在采集血液标本的过程中，向其中添加适量的促凝剂，或者直接选用配备有分离胶的专用采血管。
·凝血时间的把控： 务必等待血液标本充分凝固后，再进行离心操作。对于那些正在接受抗凝治疗的患者而言，其血液的凝集过程会有所延迟，因此需要给予更长的时间以确保血液完全凝固。
·低温过夜处理： 将血液标本置于 4℃的环境中过夜保存后，再对其进行离心操作。
·肝素治疗患者的标本采集：
针对正在接受肝素治疗的患者，由于其血液标本存在凝固不全的可能性，所以应当尽量在肝素治疗开始前采集血液标本。这
·离心条件的优化： 把血液标本小心地转移至离心管内，然后将离心管放置在离心机中，设置离心速度为≥10,000×g，并持续离心 10 分钟。
共识十八： 应规范标本前处理流程，保证样品合格，降低对免疫学检测的干扰
细菌污染
容器被污染、标本保存不当均可导致标本发生细菌污染。细菌携带的辣根过氧化物酶会引起非特异性显色，尤其是以辣根过氧化物酶为标记的ELISA检测系统，检测结果会受到较大影响。
- 标本采集与保存的基本要求：
- 务必使用洁净无污染的容器来采集标本，确保所采集的标本保持新鲜状态，并且在采集后应尽快安排检测工作，以最大程度地减少标本因放置时间过长而可能发生的成分变化和潜在污染，从而避免对检测结果产生不良影响。
- 短期与长期保存的不同策略：
- 倘若预计在 5 天内进行检测，那么可以将标本放置在 4℃的环境中进行短暂冷藏保存。这种冷藏条件能够在一定时间内延缓标本中各种成分的代谢和分解过程，维持其相对稳定的状态，同时又不会对标本的性质造成显著改变，从而保证检测结果的有效性。
- 然而，如果检测时间安排在 1 周之后，此时则需要将标本进行冻存处理。冻存能够极大程度地抑制标本内的生化反应和微生物生长，长时间地保存标本的原始特性，使得在后续进行检测时，标本依然能够准确反映出其在采集时的真实状态，确保检测结果的可信度和参考价值。
共识十九：应规范实验操作流程
某些外源性雌激素类、孕激素类，或具有雄激素效应的物质，会通过污染加样吸头或反应杯导致性激素和鳞状细胞癌抗原检测假阳性。
- 个人防护措施
- 实验操作时必须佩带手套，必要时戴口罩，避免皮肤直接接触加样吸头或反应杯。
- 实验室环境清洁维护
- 保持实验室清洁，避免加样吸头或反应杯受灰尘污染
- 意外情况的应急处理
- 如质控品等意外溅撒，应及时清洁通风。
总结
目前，有较多研究已对免疫学检测中存在的干扰进行了探索，并取得了一定的成果。需要强调的是，干扰是绝对存在的。检验科的室内质控存在局限性，检验工作者需综合考虑检验环境和患者临床表征，及时与临床沟通，优化“开具医嘱-采血-标本转运-标本接收-上机检测-结果审核-结果报告”全流程，检验技术人员应充分了解可能影响免疫学检测的各种干扰因素，采取有效的控制措施和解决策略，为临床提供精准、可靠的检验结果。
作者：北京医学会检验医学分会 上海市医学会检验医学分会 引用本文：北京医学会检验医学分会，上海市医学会检验医学分会. 免疫学检测的干扰因素和处理策略专家共识[J]. 检验医学，2024，39（12）：1131-1139. 执笔：崔丽艳，王培昌，王学锋，曹永彤，王学晶 评审专家（按姓氏笔划）：马丽娟，王永志，王佳谊，王雅杰，王辉，王蕾，厉倩，卢仁泉，刘向祎，刘庆中，刘维薇，闫存玲，闫伟，安成，李冬，李永哲，李传保，李伯安，李金明，李海霞，李敏，李绵洋，李琦，杨虹，杨翠霞，杨曦明，吴文娟，吴俊，吴蓉，邱玲，余方友，汪萍，张国军，张珏，张曼，陆志成，陈福祥，陈慧芬，范列英，林勇，林萍，岳育红，周洲，周琳，居漪，屈晨雪，胡炎伟，侯彦强，娄加陶，秦琴，袁慧，徐锦，翁文浩，郭玮，曹文俊，曹敬荣，龚倩，盛慧明，常东，崔巍，梁国威，潘秋辉 特约评审专家（按姓氏笔划）：王成彬，王清涛，关明，沈立松，郭健，潘柏申 | 
发表于 2024-12-30 10:10:03