市面上抗原检测产品大多采用免疫层析技术,类似于验孕棒。常见有胶体金法、乳胶法、荧光免疫层析法。 免疫层析技术
免疫层析技术是用于检测血清蛋白的一种结合了免疫技术和色谱层析技术的快速检测分析方法。
检测原理:在层析时,标记物与待测物的络合物被相应的配体捕获而浓集显色于硝酸纤维素膜上的检测线,以纤维膜上显色条带的有无、颜色深浅和反射光线来定性或定量检测结果。在即时检测(POCT)中应用极为广泛。
抗原检测卡一般由样品垫、结合垫、硝酸纤维素(NC)膜、检测线(T线)、质控线(C线)、吸水垫、聚苯乙烯(PS)底板等部分组成。
抗原检测卡
下面,重点来讲一讲新冠抗原检测试剂中,胶体金法、乳胶法、荧光免疫层析法中的标记物分别有什么区别。 1 胶体金 Colloidal gold 胶体金即胶体纳米金,是由氯金酸(HAuCl4)在还原剂(如白磷、抗坏血酸、枸橼酸钠、鞣酸等)作用下,聚合成一定大小的金颗粒,在静电的作用下成为稳定的胶体状态,形成带负电的疏水胶溶液。胶体金标记主要包括三种作用力,即静电作用、疏水作用及金硫键。胶体金在弱碱环境下带负电荷,可与蛋白质分子的正电荷基团形成牢固的结合。由于这种结合是静电结合,所以不影响蛋白质的生物特性。
2 乳胶法 LAT 乳胶法可以近似地认为,它用乳胶颗粒代替了胶体金颗粒,准确性方面没有明显的差异。以彩色乳胶微球作为载体的间接凝集试验。吸附可溶性抗原在其表面,特异性抗体与之结合后,产生凝集反应。目前,常用的免疫层析用彩色微球多为采用内部包埋法制备而得,染料处于微球内部,不易泄露,有比较稳定的形态结构。
胶体金法和乳胶法的原理基本类似,以双抗夹心法为例:
3 荧光免疫层析法 Fluorescent microsphere 荧光微球是指将荧光物质,比如荧光素,通过物理和化学等方法标记在粒子的表面或包埋在微球内部,一般为球形,直径在纳米到微米之间,受到激发光的激发可发出肉眼可见的荧光。
荧光微球形状和大小相对稳定,粒径均匀、单分散性好、发光效率高、重复性好,与生物体之间相互作用后产生的各种反应好,吸附性强、比表面积大、表面反应能力强和凝集作用大等。基本不受外界环境的影响,荧光物质的光学稳定性较好,需要通过免疫荧光分析仪读取荧光强度大小。是利用荧光微球表面修饰的功能基团(如羧基)与抗原或抗体等共价结合,通过荧光物质发出荧光信号而进行定量检测。
总结: 胶体金法和乳胶法的特点在于,可直接通过肉眼判断,并且操作简便、检测时间短,两者准确性方面没有明显的差异。乳胶法的显色能力强,结果显示更直观。荧光免疫层析法相较于胶体金法、乳胶法而言灵敏度更高,但在使用需要配套的荧光显色设备。 |