为了研究采血管的类型是否影响Simoa对阿尔茨海默病血浆生物标志物的定量分析，该研究招募了一个健康的队列（n = 34，11名男性，平均年龄= 28.7±7.55），并在K2-EDTA，肝素锂（Li-Hep）和肝素钠（Na-Hep）管中收集血浆。使用Simoa对血浆tau，磷酸化tau 181（p-tau181），淀粉样蛋白β（1-40）（Aβ40）和淀粉样蛋白β（1-42）（Aβ42）进行定量。该研究比较了血浆分析物的价值，以及性别对测量的影响。该研究发现，使用Li-Hep和Na-Hep管中收集的血浆tau和p-tau181水平比K2-EDTA管收集的血浆tau和p-tau181水平更高，但Aβ40，Aβ42和Aβ42 /40比率的测量值没有差异。因此，在计划测量血浆tau水平的研究时，应考虑血液收集管的类型。
题目
Head-to-Head Comparison of Different Blood Collecting Tubes for Quantification of Alzheimer’s Disease Biomarkers in Plasma生物标志物定量检测中不同采血管影响的比较
研究背景
用于神经退行性疾病的血液生物标志物将显著提高临床诊断的准确性，从而彻底改变老年医学。淀粉样蛋白β（Aβ），总tau（tau）和磷酸化tau 181（p-tau181）蛋白已被广泛研究。例如，血浆Aβ42/Aβ40比值可能反映大脑中的Aβ病理学，并以中等准确性预测异常的Aβ-PET结果。在阿尔茨海默病（AD）中发现血浆tau和p-tau181在任何其他神经退行性疾病中均未升高。特别是血浆p-tau181准确地区分了AD和非AD患者，包括认知能力下降队列中的非AD tau病理学患者。因此，当收集到大量数据时，可以建立全球参考水平用以诊断AD。然而，这种做法将需要全世界实验室或医院之间血液采集过程的标准化，这一点尚未得到充分研究。
采血管（包括 [K2-EDTA]，肝素锂[Li-Hep]，肝素钠[Na-Hep]等）可以影响各种实验室检查的结果。例如，血管的类型会影响常规血液生化结果，如白蛋白、乙酰胆碱酯酶、肌红蛋白以及激素和肿瘤标志物水平。EDTA可以与血液中凝固所需的钙离子竞争性地结合，因此不能用于金属离子生物学的研究。另一方面，肝素与抗凝血酶III结合并增强抗凝血酶III灭活丝氨酸蛋白酶的能力，肝素包被的采血管适用于红细胞脆性测试、血气分析、血细胞比容，但不适合聚合酶链反应（PCR），因为肝素抑制Taq聚合酶。
对于AD血浆生物标志物的研究，最常用的是EDTA管和肝素管。由于这些管子通过独立的机制阻止血液凝固，因此有必要了解它们是否与目标生物分子（如Aβ和tau）相互作用，从而产生不同的结果。该研究研究了采血管类型对年轻健康成年人队列中AD血浆标志物的影响。该研究使用三种不同的管子（即K2-EDTA，Li-Hep和Na-Hep）从同一个人体内收集血浆，并使用Simoa技术在相同条件下测量总tau，p-tau181，Aβ 40和Aβ 42水平，比较了计算值、比率变化、数据分布及其与性别的关联。
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研究方法
Method 34名中国汉族受试者分两个时间段登记，第一次收集于2020年11月，第二次收集于2021年8月，纳入标准如下：（1）20岁≤年龄≤60岁;（二）教育≥16年;（3）中文交流无困难。排除标准是神经系统或精神疾病和/或认知能力下降的病史。在上午8点至下午6点的时间内收集了非空腹静脉血。通过静脉穿刺收集血液样本，并按照标准程序在K2-EDTA，肝素锂和肝素钠管中收集。静置血液样品并离心（2000 r / min，10分钟，室温），将收集的纯血浆等分并立即储存在-80°C。
使用 Simoa SR-X 分析仪检测血浆 tau、p-tau181、Aβ40 和 Aβ42。具体而言，在制备阿尔茨海默病生物标志物定量时，将样品解冻并在4°C下以2000×g离心5分钟。然后将所有样品转移到96孔板中，并用样品稀释液稀释4倍，进行两步法测定，并在每个板上运行7或8个校准品样品和2个质控样品。使用Simoa Neuro 3-Plex A 试剂盒测量 tau、Aβ40 和 Aβ42 的水平，使用 Simoa p-tau181 Advantage V2 试剂盒测量 p-tau181 的水平。tau、p-tau181、Aβ40 和 Aβ42 的检测限分别为 0.0165 pg/mL、0.041 pg/mL、0.243 pg/mL和 0.147 pg/mL；tau、p-tau181、Aβ40 和 Aβ42 的分析范围分别为 0 至 400 pg/mL、0 至 424 pg/mL、0 至 600 pg/mL、0 至 200 pg/mL。
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研究结果
Results
使用来自同一批次Simoa试剂盒分别检测K2-EDTA、肝素锂和肝素钠管中血浆tau和p-tau181，肝素锂管的平均血浆tau和p-tau181水平显着高于K2-EDTA管。在比较K2-EDTA与Na-Hep时观察到类似的结果，Na-Hep管中血浆tau和p-tau181水平显着升高。肝素锂管和肝素钠管中血浆tau和p-tau181的值没有显着差异（图 1A，B）。
构建数据分布的密度图，获得了密度峰值，并比较了数据分布的相等性。肝素锂管和肝素钠管产生相似的数据分布和密度峰(图 1C,D)，均与K2-EDTA管存在显著差异，表明不同的采血管影响同一队列中tau和p-tau181水平的分布。
图1 采血管类型影响tau和p-tau181水平的检测
测量了在K2-EDTA、肝素锂和肝素钠管中收集的血浆Aβ40和Aβ42（图 2)。血浆Aβ40，Aβ42及其比率的平均值表明，三者均无明显差异。对于血浆Aβ40，Aβ42及其比率在K2-EDTA管，肝素锂管和肝素钠管之间的比率的数据分布的密度图，没有明显的模式，包括数据分布和密度峰（图 2D–F），表明不同的采血管不影响Aβ40、Aβ42的分布及其在同一队列中的比例。
图2 采血管类型不影响Aβ水平的检测
按性别划分数据来进一步分析，发现在不同采血方式下，男性和女性的tau(图3A)、p-tau181(图3B)、A42(图3D)和A42/40比值(图3E)均无显著差异。女性在Li-Hep管(p = 0.018，图3C)和Na-Hep管(p = 0.026，图3C)中血浆Aβ40水平显著升高，在K2-EDTA管中也观察到类似的结果(p = 0.095，图3C)，说明采血不影响性别间生物标志物的差异。
图3 采血管类型不影响不同性别生物标志物水平的检测
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结果讨论
该研究探索了采血管对使用Simoa平台检测的血浆AD生物标志物的影响。该方法已广泛应用于各种研究中，随着该领域向临床转化方向发展，需要了解测量值的影响因素。Verberk等人最近研究了分析前样品处理对AD血液生物标志物的影响，包括采血管类型、延迟离心时间、离心温度、等分试样体积、延迟储存和冻融。与肝素锂管和肝素钠管相比，K2-EDTA管检出的tau和p-tau181值偏低，但Aβ40，Aβ42和Aβ42 / Aβ40比率的分析物不受采血管的影响。该研究比较了AD血液基生物标志物的分布以及不同采血管之间男性和女性之间的差异，为AD生物标志物研究提供了进一步的信息。
由于检测原理基于抗原-抗体反应，该研究推测肝素可能在分析过程中影响tau与抗体的结合。Tau是一种在神经元中高度富集的蛋白质，最初是通过其结合、稳定微管的能力发现的。之前有报道称，tau蛋白的聚集是由硫酸乙酰肝素（HS）在体外促进的。由于肝素与较昂贵的硫酸乙酰肝素具有相似的化学性质，因此它已被用于在体外诱导tau聚集。因此，该研究建议Li-Hep和Na-Hep管中的肝素可能会影响血浆tau的聚集，这扰乱了其与检测抗体的结合并最终影响了读数。
这项研究表明，肝素改变了Simoa方法检测到的血浆tau蛋白值。因此，在对血浆tau或者其他AD的生物标志物研究进行研究时，应考虑采血管的类型。
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发表于 2022-11-3 20:36:49
