新冠疫情尚未褪去，猴痘病毒又接踵而至。随着不同应用场景病毒检测的需要，CRISPR分子诊断技术因其可与PCR、LAMP及RPA/RAA等多种核酸扩增手段高效对接，并具有病原物快速、准确鉴定的优势，在传染病的即时检测技术中迅速崛起，并成为科研及IVD行业中蓬勃发展的方向之一。
目前市场上广泛商业化的CRISPR核酸检测试纸条仅能显示单一报告分子的切割产物，因此虽然科研领域已经形成大量重磅级别的研究成果，但仍然难以满足IVD行业对同一样品双靶标阳性的检测需求，因而未能得到广泛应用。
Tiosbio聚焦体外诊断核酸检测试纸条产品的“科技创新+先进制造”，重磅推出了两款基于CRISPR Cas的双靶标核酸检测试纸条新品：
1. 扩增产物及Cas酶切产物检测试纸条（JY0307）JY0307适用于IVD病原物快检试剂盒。内参基因的质控通过双链扩增产物的检测线T2显示，监控检测流程中核酸释放、扩增步骤是否正常工作；CRISPR信号探针切割产物的检测线T1对标靶基因的信号放大过程，确保了靶基因高特异性和高灵敏度的检测。
当CRISPR信号探针（检测线T1）、双链扩增产物（检测线T2）做如下修饰时，即可使用JY0307进行检测——CRISPR信号探针的一端修饰有生物素（Biotin），另一端修饰有异硫氰酸荧光素（FITC）或6-羧基荧光素（6-FAM）；扩增产物一端修饰有地高辛（Dig），另一端修饰有罗丹明（TAMRA）。
JY0307不同检测线和质控线的显色结果含义如下图所示。
2. Cas12/Cas13双酶切产物检测试纸条（JY0308）
JY0308适用于双链产物在同一体系进行Cas12和Cas13双酶切后的产物检测。当靶基因经PCR、LAMP、RPA/RAA扩增后，在同一体系内，使用Cas12和Cas13酶同时对扩增产物进行切割，Cas12酶对应的DNA信号探针A（Cas12切割），与Cas13酶对应的RNA信号探针B（Cas13切割）进行如下修饰，即可使用JY0308进行切割产物的检测——其中，DNA信号探针A一端修饰有生物素（Biotin），另一端修饰有异硫氰酸荧光素（FITC）或6-羧基荧光素（6-FAM），RNA信号探针B一端修饰有生物素（Biotin），另一端修饰有地高辛（Dig）；或DNA信号探针A一端修饰有生物素（Biotin），另一端修饰有地高辛（Dig），RNA信号探针B一端修饰有生物素（Biotin），另一端修饰有异硫氰酸荧光素（FITC）或6-羧基荧光素（6-FAM）。
JY0308的特别之处在于，该产品为变色双矫正显色试纸条。当DNA信号探针A和RNA信号探针B均发生酶切反应，但酶切反应不完全的情况下，质控线C、检测线T1和检测线T2均会显色，其中质控线C为紫色，检测线T1为红色，检测线T2为蓝色；当DNA信号探针A和RNA信号探针B完全酶切的情况下，只有检测线T1和检测线T2显色，其中T1为红色，T2为蓝色。在探针A和探针B等摩尔浓度混合，且终浓度≤500nM时，带有FAM标记的探针发生酶切反应，而带有Dig标记的探针未被酶切时，仅有检测线T1为红色，质控线C为蓝色；带有Dig标记的探针发生酶切反应，而带有FAM标记的探针未被酶切时，仅有检测线T2为蓝色，质控线C为红色，从而达到互相矫正的目的。
JY0308不同检测线和质控线的显色结果含义如下图所示。
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发表于 2022-9-17 17:24:51