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近日，朋友圈在有关新冠核酸检测试剂内标的话题，引起了广泛的争议，事件起因于某临检中心要求“人源标本用内源性内参；非人源标本用外源性内参”。这可急坏了使用外源性内标的新冠核酸试剂厂家，毕竟环境标本才有多少！
什么是内标？
内标：内部检测标准，通过内标的设置，来监控提取和扩增过程，防止假阴性！
内标的设置有两种模式： 内源性内标：采用的是样本当中固有的人细胞中的管家基因，看家基因（house-keeping gene）因为其表达水平受环境因素影响较小，而且在个体各个生长阶段的几乎全部组织中持续表达变化很小。常用的管家基因包括GAPDH、β-actin(BETA-actin)、18sRNA、B2M、HPRT和TBP等。
内源性内标的优点：既可以监测是否采集到足量细胞，又可以检测提取和扩增检测过程。
内源性内标的缺点：如果样品类型是口腔液，咽拭子等样品，管家基因的量很低可能导致实验不成立。如果检测的是环境样品则内参基因可能完全失效。
外源性内标：外加到提取溶液中的，人工设计合成的与模板扩增效率相似的一个基因片段。由各个生产企业制备，不同厂家之间不建议混用。
外源性内标的优点：更好的反映核酸提取及扩增检测过程（与真实病毒模板在基因序列上相近，扩增效率相近）。
外源性内标的缺点：不能监测是否采到足量的细胞，存在竞争性抑制的可能。
内标的设置一开始就是为了避免“假阴性”的出现，监控整个反应过程是否顺利进行，无论是内源性还是外源性的内标都可以满足这个需求。
临床上避免“假阴性”的措施
标本采集时要采集到含有病毒的细胞，理论上说，目前的注册试剂都包含检测人细胞或外源性的序列“内参”，如果是人源性的内参（如含有一个单联RNA分子的RNase P）。则其可以监测是否采集到足够量的细胞，但是，采集部位不当，如采集口咽拭子时，采集深度不够，采集鼻咽拭子没有采到鼻腔深处，采集痰液时，并没有得到真正的痰等，也有可能采集到的细胞绝大部分都是不含病毒的细胞，即可能造成“假阴性”。通过加强对标本采集人员的培训，可以在很大程度上解决该问题。
如上所述，临床层面上的核酸检测“假阴性”也是无法完全避免的，那是不是我们就一点别的办法也没有呢？不是的，目前一个行之有效的办法，就是在患者病毒核酸检测阴性时，但临床又疑似为新冠病毒感染时，可以补充新型冠状病毒特异抗体检测。 ------------------------------------------------------------------------------
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发表于 2021-1-27 22:27:26
