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作者：冯璟1 任玉莲2 柏明见1 高丽欣3 白爽爽4 何美琳1 梁国威1 单位：1.航天中心医院检验科，2.航天中心医院门诊部，3.航天中心医院产科，4.北京大学人民医院产科
冯 璟
现任航天中心医院检验科主管技师，主要从事临检及分子生物学诊断专业。目前已发表论文10余篇，参编著作一部，参与全自动尿液分析系统自动审核规则建立与验证的多中心研究课题。
【摘要】目的 评价妊娠晚期孕妇两次检测B群链球菌（group B streptococcus，GBS）的临床价值。方法 通过LIS系统及HIS系统回顾性收集航天中心医院孕妇GBS的检测结果，时间为2017年1月13日到2020年2月21日。对检测一次GBS与孕34周及孕37周检测两次GBS的阳性率进行比较。对两次检测GBS的孕妇，比较孕34周与孕37周检测GBS结果，比较阳性率有无差异及检测的一致性。结果 共5224例孕妇检测GBS，仅检测一次GBS的孕妇阳性率为9.88%（154/1559），检测两次GBS的孕妇（以任意一次结果阳性即为阳性）阳性率为13.49%（497/3685），差异有统计学意义（x2=13.123，P =0.001）。两次检测GBS的孕妇中34周阳性的比例为10.77%（397/3685），37周阳性的比例为10.88%（401/3685），二者相比GBS阳性率差异无统计学意义，Kappa值为0.724（P =0.001），提示34周与37周检测GBS结果一致性一般。结论 孕34周与孕37周两次检测GBS阳性率明显高于单次GBS检测阳性率，两次检测能够降低漏检率，此外，两次检测GBS的一致性一般，孕妇在孕晚期检测两次GBS是必要的，对孕妇及新生儿能够做出更好的提前干预，降低感染等相关风险的发生。【关键词】孕妇；B群链球菌；荧光定量PCR；阳性率
B群链球菌（group B streptococcus，GBS）又称无乳链球菌，正常寄居于阴道和直肠，是一种条件致病菌，一般正常健康人群感染GBS并不致病，但GBS是孕产妇生殖道感染的重要致病菌[1]，可导致泌尿系统感染、羊膜绒毛膜炎、产褥感染、孕产妇败血症等，它与早产、胎膜早破、新生儿败血症等疾患有关[2]。妊娠期GBS感染的危害远高于非妊娠人群。因此，妊娠期妇女常规筛查GBS至关重要，其对孕妇的妊娠及新生儿的健康有着极其重要的临床意义[3]。2010年，美国CDC出版的指南中推荐对孕35-37周孕妇的阴道及直肠进行GBS筛查[1]，指南推荐常规采用增菌培养的方法进行GBS检测，但普通的细菌培养方法有一定的缺陷，例如标本检测时间过长，不能够及时将结果报告给临床，其次培养的敏感性往往不理想，尤其是在未增菌的情况下，可以导致50%的漏诊发生[4]，因此，需要更敏感的方法，同时特异性亦较高[2]。国外对34项关于实时荧光定量PCR（RT-PCR）检测孕妇GBS的研究进行Meta分析显示，应用RT-PCR技术检测孕妇GBS有较好的灵敏度及特异度，SROC曲线下面积达到0.99[5]，国内的相关研究也得到了类似的结果[6]，因此，采用分子生物学的方法检测GBS越来越成熟。
临床工作中，标本采集的时间、方法等对微生物的检测结果起到了至关重要的作用[7]，同样，在临床工作中，我们发现部分孕妇在孕34周与孕37周GBS检测结果出现不一致的情况，因此考虑需要统计两个不同时间点GBS检测阳性率有无差异，验证孕晚期两次检测GBS的价值，以提高孕妇GBS的检出率，降低GBS感染 的漏诊率，对孕妇及新生儿均有重要的意义。
一 研究对象与方法
1. 一般资料：本研究采用回顾性资料收集，所有结果均记录于航天中心医院的LIS系统及HIS系统，结果均为客观记录数据，研究经过航天中心医院伦理委员会批准。数据收集时间为2017年1月13日到2020年2月21日于我院进行GBS检测的孕妇，共5224例，其中1559例孕妇仅在35-37周检测一次GBS，3685例孕妇分别在孕34周及孕37周检测两次GBS。
2. 标本采集：先拭去阴道过多的分泌物，采用无菌拭子先自受检者生殖道部位l／3处沿壁轻轻旋转取得阴道分泌物样本，再用同一个拭子再进到肛门取标本，进到肛门里的拭子深度需通过肛门括约肌才算合格，最后将采集的拭子置于无菌管中密闭送检。
3. 检验方法：利用实时荧光定量PCR技术，针对B族链球菌基因组特异且无高频SNP位点的序列区域cAMP因子，设计出特异性引物和探针，配以全封闭PCR体系，用ABI7500检测标本中的GBS的DNA。严格按照试剂盒说明书进行操作，GBS检测荧光素为FAM，内参照荧光素为VIC，设置内参防止假阴性结果的出现，研究体系中加入UNG酶，预防非特异性PCR扩增和污染。反应体积40ul，循环参数：50℃ 2min；95℃ 5min；95℃15s～60℃35s，45个循环；60℃时分别检测FAM和VIC通道荧光信号。结果判断：样本（FAM）Ct值≤38，且有较好的对数增长曲线，判读为阳性；若样本FAM通道Ct值≥45，而VIC通道信号正常（Ct≤35）则判读为阴性；样本（FAM）38＜Ct值＜45，复查或重新采样检测，复测后样本（FAM）Ct值≤38或38＜Ct值＜45均判定为阳性，若样本FAM通道Ct值≥45判定为阴性。
4. 统计学方法：采用SPSS 16.0统计学软件对数据进行统计分析。计数资料以率（%）表示，组间率的比较采用x2检验，在推断两个样本的总体分布是否相同时，采用一般四格表x2检验，对于同一总体进行不同时间点检测的结果比较采用配对四格表x2检验（又称为McNemar检验），一致性程度采用Kappa检验值表示，当Kappa值≥0.75时表示二者一致性较好，当0.4≤Kappa值＜0.75时表示一致性一般，当Kappa值＜0.40时表示二者一致性较差。当组间量的比较采用t检验或非参数检验。双侧P ＜0.05表示差异具有统计学意义。
二 研究结果
1. 共5224例孕妇检测GBS，仅检测一次GBS的孕妇（1559例）平均年龄为30.8±4.6岁，检测两次GBS的孕妇（3685例）平均年龄为30.6±4.2岁，二组相比，差异无统计学意义（t =1.756，P =0.079）。
2. 仅检测一次GBS的孕妇GBS阳性率为9.88%（154/1559）。两次检测GBS的孕妇结果如下，34周及37周两次均阳性为301例，34周阳性37周阴性为96例，34周阴性37周阳性为100例，34周及37周两次均阴性为3118例，以任意一次结果阳性即为阳性，阳性率为13.49%（497/3685）。只测一次组与测两次组二者相比，差异有统计学意义（x2=13.123，P =0.001）。
3. 两次检测GBS的孕妇中34周阳性的比例为 10.77%（397/3685），37周阳性的比例为10.88%（401/3685），McNemar检验显示P =0.830，提示34周与37周检测GBS阳性率差异无统计学意义，Kappa值为0.724（P =0.001），提示34周与37周检测GBS结果一致性一般。
三 分析与讨论
临床多项研究发现，GBS已成为我国新生儿感染性疾病的主要致病菌[8]。研究发现，在孕早、中期，如无诱因，GBS不易上行侵入羊膜腔引起宫内感染，所以目 前主张孕晚期再检测GBS[9]，2010年的指南中推荐35-37周检测GBS[1]。GBS的检出率受到多种因素的影响，例如取材部位、检测时间及检测方法等。传统的细菌培养法灵敏度低，检测周期长。本研究运用了先进的RT-PCR的分子诊断方法，快速检测，灵敏度高，特异性强，重复性好，操作方便，常规筛查阳性率高避免漏诊。此外，荧光定量PCR法在一些比较紧急的情况下，如胎膜早破、早产等，快速检测的结果对降低新生儿的发病率及死亡率有重要的意义。本研究回顾性的分析了孕晚期两次检测GBS与单次检测GBS结果的差异，为今后的GBS检测工作提供一定的证据。
研究中单次检测GBS的孕妇与两次检测GBS的孕妇年龄相比，差异无统计学意义，提示研究纳入的单次与两次检测GBS孕妇年龄选择上不存在偏倚，对研究结果的推广提供了一定的保障。研究显示，孕妇在34周和37周做两次B群链球菌检测的阳性率大于单次检测者，差异有统计学意义，提示在孕晚期单次检测GBS可能存在一定的漏诊率。考虑造成单次与两次结果差异的原因如下，GBS为正常人群中在阴道及消化道的定植菌，在检测过程中发现GBS在孕期中的定植状态会出现变化，有时甚至是一过性的短暂定植状态，因此选择标本的检测时间至关重要[10]，因此，两次检测GBS时检出几率会大于单次检测几率。由此可见，单次检测GBS可能会导致部分孕妇GBS感染的漏诊，孕晚期两次检测可以避免部分孕妇GBS的漏诊。
本研究发现，对于两次检测GBS的孕妇中，孕34周与孕37周检测的阳性率接近，差异无统计学意义，说明，在孕晚期检测GBS时，选择的检测时间范围相对较大，即可接近分娩期，也可提前部分时间，但在一致性检验时，发现孕34周与孕37周检测GBS结果的一致性一般，有相当一部分孕妇孕34周阳性而37周阴性或孕34周阴性而37周阳性，而指南推荐的为35-37周检测GBS，因此，有必要对孕34周与孕37周两次均检测GBS，降低漏检率。
总之，本研究发现孕34周与孕37周两次检测GBS阳性率明显高于单次GBS检测阳性率，两次检测能够降低漏检率，同时发现两次检测GBS的一致性一般，因此，孕妇在孕晚期检测两次GBS是必要的，对孕妇及新生儿更够做出更好的提前干预，降低感染等相关风险的发生。
参考文献略
注：本文来源于《临床实验室》2020年第9期“生殖与女性健康”专题
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发表于 2020-9-20 22:09:58
